بیان آنتی بادی زنجیره سنگین شتری(نانوبادی)علیه نوروتوکسین بوتولینوم تیپ e در pichia pastoris

thesis
abstract

چکیده مخمر پیکیا پاستوریس یک میزبان برجسته برای تولید پروتئین های نوترکیب است و در مقایسه با دیگر سیستم های بیانی مزایای فراوانی دارد. از جمله اینکه این سیستم به عنوان یک یوکاریوت، قادر است تعداد زیادی از تغییرات پس از ترجمه همچون پردازش پروتئولتیک، فولدینگ صحیح، تشکیل پیوند های دی سولفیدی و گلیکوزیلاسیون پروتئین ها را انجام دهد. همچنین قادر به استفاده از متانول به عنوان تنها منبع کربن در غیاب گلوکز و ترشح پروتئین های تولید شده به محیط می باشد. با وجود این مزایا پیکیا پاستوریس می تواند یک جایگزین عالی برای سیستم بیانی اشرشیا کلی باشد. در این پژوهش، آنتی بادی زنجیره سنگین شتری علیه نوروتوکسین بوتولینوم نوع e در پیکیا پاستوریس بیان و سپس تخلیص گردید. ژن vhh دروکتور ppink-hc کلون و در ابتدا به باکتری اشرشیا کلی(top10) منتقل شد. وکتور™ pichiapink حاوی ژن vhh به منظور ورود به ژنوم مخمرخطی شد و به سلول های مستعد مخمری منتقل گردید. تعدادی از کلونی های ترانسفورم شده انتخاب و در محیط کشت بیانی مخمر(bmgy ) کشت داده شد. vhh نوترکیب درپیکیا پاستوریس بیان شد. بیان پروتئین به وسیله sds-page آنالیز گردید و مشاهده شد که میزان بیان پروتئین در مخمر پیکیا پاستوریس نسبت به باکتری اشرشیا کلی بالاتر است. کارایی نانوبادی بیان شده در مخمر، در بدن موجودات زنده (موش) مورد ارزیابی قرار گرفت. همچنین مقایسه ای میان کارایی نانوبادی بیان شده در مخمر و باکتری صورت پذیرفت. نانوبادی بیان شده در مخمر توانست در بدن موش های مورد آزمایش، دوز کشنده 50 درصد توکسین را، در 25 درصد موش ها تا 4 برابر افزایش دهد. همچنین نانوبادی بیان شده در باکتری توانست زمان زنده ماندن موش ها را به دو برابر افزایش دهد. در پایان مشخص شد که نانوبادی بیان شده در مخمر در جهت مهار توکسین کارایی بهتری دارد.

First 15 pages

Signup for downloading 15 first pages

Already have an account?login

similar resources

همسانه سازی و بیان ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در باکتری E.coli

Background and purpose: Clostridium botulinum bacteria produces seven types of botulinum neurotoxins among which types A, B, E and F are responsible for human botulism. One of the treatments for botulism is the inhibition of botulinum neurotoxins catalytic domain activity by inhibitors. In this study, botulinum neurotoxin type E catalytic domain has been cloned in pET28a vector and expressed in...

full text

مطالعه توده ای شدن حرارتی کاندیدای واکسن بوتولینوم در انتهای کربوکسیل نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E

زمینه و هدف: مطالعه توده ای شدن حرارتی پروتئین یک روش ساده و مفید برای مطالعه مقاومت پروتئین به واسرشتگی حرارتی است و اطلاعات ارزشمندی در مورد ساختار پروتئین ارائه می دهد. از آنجایی که تا به حال هیچگونه اطلاعاتی در مورد ساختار زیر واحد اتصال دهنده ی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E (rBoNT/E-HCC) گزارش نشده است، لذا این مطالعه با هدف بررسی ساختاری پروتئین مذکور، یافتن شرایط pH بهینه برای آن و توده ا...

full text

تولید آنتی توکسین کلستریدیوم بوتولینوم تیپ E

  اهداف: توکسین بوتولینوم به‌­عنوان قوی­‌ترین توکسین شناخته می­‌شود. این توکسین علاوه بر کاربردهای درمانی در پزشکی (بوتاکس)، تهدیدی در جنگ­‌های زیستی و بیوتروریسم است. تهیه آنتی­‌بادی علیه توکسین کلستریدیوم بوتولینوم تیپ A تا G علاوه بر کاربرد در شناسایی جدایه‌های کلستریدیوم بوتولینوم توکسیژنیک، در درمان مسمومیت ناشی از این توکسین نیز نقش دارد. هدف از این مطالعه، تولید آنتی­‌توکسین کلستریدیوم ب...

full text

بررسی ایمنی‌زایی نانوذرات کیتوسان حاوی پروتئین نوترکیب ناحیه اتصال‌دهنده نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در موش

Abstract Background and purpose: Clostridium botulinum neurotoxins are the most potent toxins that cause the life-threatening botulism syndrome in humans and animals. Researches have shown that the binding domain of the botulinum neurotoxin type E has a high immunogenicity effect that could be used as an efficient recombinant vaccine. The recombinant vaccines are not potent enough to stimulate...

full text

همسانه سازی و بیان ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ e در باکتری e.coli

سابقه و هدف: باکتری های کلستریدیوم بوتولینوم هفت نوع نوروتوکسین تولید می کنند که تیپ های a، b، e و f منجر به بوتولیسم در انسان می شوند. یکی از روش های درمانی بوتولیسم می تواند از طریق مهار فعالیت آنزیمی ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم توسط مهارکننده ها باشد. در این مطالعه، ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ e در وکتور بیانی pet28a همسانه سازی و در باکتری میزبان e. coli سویه bl21(de3)...

full text

بیان نوترکیب و تخلیص زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپa در e. coli از یک ژن مصنوعی

نوروتوکسین های بوتولینوم، سمی ترین ترکیبات بیولوژیک شناخته­­ شده اند که باعث ایجاد فلج عضلانی می­شوند. خاصیت آنزیمی این توکسین ها، مهار آزاد­سازی میانجی عصبی استیل کولین را باعث می­شود. مطالعه حاضر با هدف تولید نوترکیب بخش کاتالیتیک (زنجیره سبک) سم بوتولینوم تیپ a با درصد خلوص بالا، به منظور ارزیابی فعالیت آنزیمی انجام شد.  توالی ژن زنجیره کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ a از پایگاه ژنی ncbi...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شاهد - دانشکده علوم پایه

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023